發布時間：2021-09-27所屬分類：醫學論文瀏覽：1次
摘 要： 摘要：目的建立不同中藥中蛇床子素的含量測定方法。方法采用AgilentZORBAXSBC18色譜柱(250mm4.6mm，5m)，流動相為甲醇-體積分數0.05%磷酸溶液(體積比70:30)，流速為1.0mLmin-1，檢測波長為322nm，柱溫30℃。結果蛇床子素在質量濃度為0.100～1.90gL-1內與峰面
摘要：目的建立不同中藥中蛇床子素的含量測定方法。方法采用AgilentZORBAXSBC18色譜柱(250mm×4.6mm，5µm)，流動相為甲醇-體積分數0.05%磷酸溶液(體積比70:30)，流速為1.0mL·min-1，檢測波長為322nm，柱溫30℃。結果蛇床子素在質量濃度為0.100～1.90g·L-1內與峰面積呈良好的線性關系。精密度、重復性及穩定性試驗的RSD分別為0.36%、0.28%、0.45%，均符合要求。高、中、低平均加樣回收率分別為98.35%、100.78%、101.4%。蛇床子、菟絲子、獨活、白芷、白前等中藥材中蛇床子素的含量分別為7.74、0.0230、7.42、0.0419、4.43mg·g-1。結論建立的高效液相色譜法方法簡便，準確，快速，重復性好，專屬性好，可應用于不同中藥中蛇床子素的含量測定。
關鍵詞：高效液相色譜法;蛇床子素;含量測定;外標法
蛇床子、獨活等中藥材均含有蛇床子素的成分[1-2]，蛇床子素是香豆素類成分中最主要藥效成分，具有鎮靜、抗炎、免疫調節，保護神經，抗骨質疏松，保護心血管，保護腎臟的功效，在現代藥理學中的作用尤為顯著[3]。
1儀器與材料
Waterse2695高效液相色譜儀(美國Waters公司)，KQ-500E型數控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)，FR224CN型電子天平(奧豪斯儀器上海有限公司)，凱特離心機(鹽城凱特實驗儀器有限公司)，GM0.33A隔膜真空泵(天津市津騰實驗設備有限公司)
甲醇(美國天地高純溶劑有限公司)，水(杭州娃哈哈集團有限公司)，蛇床子素對照品(批號17080510，含量質量分數99.81%)。
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蛇床子[Cnidiummonnieri(L.)Cuss]、獨活(AngelicapubescensMaxim.f.biserrataShanetYuan)、白芷[Angelicadahurica(Fisch.exHoffm.)Benth.etHook.f.exFranch.etSav]等藥店購買，產地四川，菟絲子(CuscutachinensisLam.)、白前[Cynanchumstauntonii(Decne.)Schltr.exLevl]等藥店購買，產地安徽。以上中藥均由山東第一醫科大學中藥學教研室曲曉蘭副教授鑒定均符合《中華人民共和國藥典》2020年版(一部)項下有關規定。
2方法與結果
2.1溶液的制備
2.1.1供試品溶液的制備
將適量蛇床子藥材于研缽內研磨成粉末，稱取5g置于50mL棕色量瓶中，甲醇定容至刻度，超聲處理30min，室溫冷卻，甲醇補足至刻度，靜置片刻，于3000r·min-1離心5min，將上清液經0.45µm微孔濾膜濾過，濾去初濾液2.0～3.0mL，取續濾液即得，備用。
2.1.2對照品溶液的制備
取蛇床子素對照品適量，加甲醇定容至25mL棕色量瓶中，搖勻，制得質量濃度為2.016g·L-1的蛇床子素儲備液。
2.2色譜條件
色譜柱為AglientC18柱(250mm×4.6mm，5µm)，流動相為甲醇-體積分數0.05%磷酸(體積比70:30)。檢測波長為322nm，流速為1.0mL·min-1，進樣量為10µL，柱溫為30℃[4]。
2.3方法學考察
2.3.1專屬性試驗
分別將甲醇(溶劑)、蛇床子素對照品溶液、蛇床子供試品溶液，按照“2.2”條色譜條件進樣，測得色譜圖。由圖1可知，蛇床子素的保留時間為11.9min。供試品溶液主峰的保留時間與蛇床子素對照品的色譜峰保留時間一致。以蛇床子素色譜峰計算理論塔板數為1600，與相鄰組分分離較好。
2.3.2線性與范圍
分別精密量取蛇床子素對照品儲備液0.496、2.73、4.96、7.19和9.43mL置10mL量瓶內，并用甲醇定容至刻度，搖晃均勻，即可得到質量濃度為0.100、0.550、1.00、1.45和1.90g·L-1的蛇床子素對照品溶液，按“2.2”條色譜條件各質量濃度對照品溶液分別進樣3次，取平均值，以峰面積(A)為縱坐標，質量濃度為橫坐標(ρ，g·L-1)繪制標準曲線圖。所得回歸方程為：A=3.0×107ρ-3.0×105，r=0.9992。結果表明，蛇床子素在質量濃度為0.100～1.90g·L-1內與峰面積線性關系良好。
2.3.3精密度試驗
取“2.1.1”項下供試品溶液，按“2.2”條色譜條件，進樣量為10µL，重復進樣6次，記錄色譜圖，記錄蛇床子素的峰面積。計算蛇床子素的RSD為0.36%，小于3.0%，表明該方法的精密度良好。
2.3.4穩定性試驗
按“2.1.1”項下方法新配制蛇床子供試品溶液，室溫下放置，分別在0、2、4、6、8、10、12h等不同時間點分別進樣，記錄蛇床子素的峰面積。計算蛇床子素RSD為0.45%，小于3.0%，結果表明本蛇床子供試品溶液在12h內保持穩定，穩定性良好。
2.3.5重復性試驗
取蛇床子粉末6份，分別按“2.1.1”項下實驗方法配制溶液，按“2.2”項下色譜條件進行進樣分析，記錄蛇床子素的峰面積。計算蛇床子素的RSD為0.28%，小于3.0%，重復性良好。
2.3.6加樣回收率試驗
按“2.1.1”項下方法配制蛇床子溶液3份，分別按80%、100%、120%高中低3個不同質量濃度精密量取對照品儲備液加入其中，甲醇定容至刻度，搖晃均勻，精密量取1mL于進樣瓶進樣，進樣量10µL，每種質量濃度進樣3次。每份按照“2.2”項下色譜條件進行測定。分別記錄其色譜圖峰面積。結果見表1。
2.3.7樣品含量測定
取菟絲子、獨活、白芷、白前等中藥藥材，分別將其置于研缽內研成細粉，按“2.1.1”項下方法制備供試溶液，分別按“2.2”項下色譜條件取3份進行測定[5]，結果見表2。
3討論
通過在實驗過程中對高效液相色譜條件的不斷優化，使蛇床子素的出峰時間和分離效果較好，本實驗首先通過對蛇床子素標準品溶液進樣，進行梯度洗脫以確定試驗中流動相的大體比例，后采用等度洗脫對流動相的比例進行調整，進一步選擇最適合于該試驗的流動相比例，來達到優化的目的，使實驗的結果更加的可靠。
實驗中以甲醇作為有機相，調試水相來使色譜峰分的更好，分別嘗試不同體積分數的甲酸、冰醋酸、磷酸等不同流動相作為該實驗的水相[6-7]，進樣蛇床子素標準品溶液得到標準品的色譜圖，從色譜圖比較來看，當水相為0.05%磷酸水溶液的時候，色譜圖中蛇床子素的所出的峰更加穩定分離效果更好，與其他峰的干擾小。
關于蛇床子、獨活等中藥中蛇床子素的提�。骸吨腥A人民共和國藥典》2015版(一部)均是采用無水乙醇溶解、超聲處理[8]，其提取方法簡便、快速，但無水乙醇極易揮發，導致所配制的溶液濃度極不穩定，導致耗時、耗材。有文獻采用薄層色譜法測蛇床子素的含量[9]，手動操作比較多，人為的影響因素大，重現性不好。本實驗在查閱以及研究文獻的基礎上，采用甲醇溶解、超聲，提取方法同于《中華人民共和國藥典》2015年版，提取效果相似，配制的溶液較為穩定。通過e2695高效液相色譜儀自動進樣測定、消除人為因素，且方法簡便快捷，重現性較好。——論文作者：趙新紅，張作華，范珊，侯雪芹，齊永秀*，李珂*
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