發布時間：2020-01-17所屬分類：醫學職稱論文瀏覽：1次
摘 要： 摘要：目的建立測定益氣止渴丸中梓醇含量的方法。方法采用反相高效液相色譜法。色譜柱為Apollo-C18柱，流動相為乙腈-0.12%磷酸溶液(0.9:99.1，V/V)，流速為0.9mL/min，柱溫為30℃，檢測波長為210nm，進樣量為10L。結果梓醇的檢測濃度在2.014-20.14g/mL范圍內
摘要：目的建立測定益氣止渴丸中梓醇含量的方法。方法采用反相高效液相色譜法。色譜柱為Apollo-C18柱，流動相為乙腈-0.12%磷酸溶液(0.9:99.1，V/V)，流速為0.9mL/min，柱溫為30℃，檢測波長為210nm，進樣量為10μL。結果梓醇的檢測濃度在2.014-20.14μg/mL范圍內與其峰面積積分值呈良好的線性關系(r=0.9994)，平均加樣回收率為98.6%，RSD=1.93(n=6)。結論該檢驗方法簡便、專屬、準確、重復性好，可以用于益氣止渴丸中梓醇的含量測定。
關鍵詞：益氣止渴丸;梓醇;高效液相色譜法;含量測定
0 引言
益氣止渴丸是吉林省長春市內某醫療機構內部研發的，車間生產的中藥品種，是復方制劑。由地黃、天花粉、葛根、麥冬、甘草等七味中藥組方而成。具有益氣生津，潤燥養陰，培本降糖的功效。主要用于II型糖尿病之多飲、多食、多尿，消瘦乏力、視物昏花、肢體麻木疼痛等病證。組方中重用地黃，為君藥，而地黃的主要有效成分之一為梓醇，所以多數情況下都以梓醇作為地黃成方制劑的質量控制指標。因此，本實驗采用反相高效液相色譜法測定益氣止渴丸中梓醇的含量。
1 儀器與試藥
LC-2030型HPLC儀，紫外檢測器;METTLERTOLEDOAG135型電子天平：
益氣止渴丸(為吉林省長春市內某醫療機構制劑室研發部門提供，規格：每瓶裝60g，批號：20171001、20171002、20171003);梓醇對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：110808-200306);乙腈(美國Fisher公司，色譜純);甲醇(美國Fisher公司，色譜純);水(市售娃哈哈純凈水)[1]。
2 方法與結果
2.1 色譜條件。色譜柱：CAPCELLPAK-C18柱(250mm×4.6mm，5μm);流動相：乙腈-0.12%磷酸溶液(0.9:99.1，V/V);流速：0.9mL/min;柱溫：30℃;檢測波長：210nm;進樣量：10μL。在此色譜條件下，梓醇與相鄰雜質峰的分離度均大于1.5，理論板數按梓醇峰計算為5000。
2.2 溶液的制備
2.2.1 對照品溶液的制備：取梓醇對照品適量，精密稱定，置50mL容量瓶中，加甲醇適量使溶解，再加甲醇稀釋至刻度，搖勻，制成每1mL中含梓醇0.2014mg的溶液，即得。
2.2.2 供試品溶液的制備：取益氣止渴丸適量，研細，取約3.0g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25mL，稱定重量，置水浴上加熱回流1.5h，放冷至室溫，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過。精密量取續濾液10mL，濃縮至近干，殘渣用流動相溶解，轉移至10mL容量瓶中，并用甲醇稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm的微孔濾膜濾過，取續濾液作為供試品溶液。
2.2.3 陰性對照溶液的制備：按益氣止渴丸處方配比及制備工藝，取除處方中地黃外的其它藥材，按照益氣止渴丸的制備工藝制備，制成無地黃的陰性樣品粉末，再按“2.2.2”項供試品溶液制備的處理方法制備陰性對照溶液，結果表明空白對照溶液在梓醇出峰時間處無干擾，選擇的方法具有合理性。取上述三種溶液，按“2.1”項下的色譜條件注入高效液相色譜儀，色譜圖見圖1。
2.3 線性關系考察。精密稱取梓醇對照品10.07mg，置50mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別精密吸取上述梓醇對照品溶液各1.0mL、2.0mL、4.0mL、5.0mL、6.0mL、8.0mL、10.0mL，置100mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻。分別精密量取10μL注入液相色譜儀，按“2.1”項下的色譜條件進行分析。以峰面積積分值為縱坐標(y)，質量濃度為橫坐標(x，μg/mL)繪制標準曲線，得到回歸方程y=1505.4x+190.99(r=0.9994)。結果表明，梓醇檢測濃度在2.014-20.14μg/mL范圍內與其峰面積積分值呈良好的線性關系。
2.4 精密度試驗。取同一份按照“2.2.1”項下制備的梓醇對照品溶液(濃度為0.2104mg/mL)適量，按照“2.1”項下色譜條件進行分析，精密吸取10μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，結果見表1。
2.5 穩定性試驗。取同一份按照“2.2.2”項下制備的供試品溶液適量，分別放置0、2、4、6、8、10、12、24h后按照“2.1”項下色譜條件進行分析，進樣量10μL，結果見表2。
結果，平均：222902，RSD=1.4%，表明供試品溶液在24h內穩定。
2.6 重復性試驗。精密稱取同一供試品(批號：20171002)適量，按照“2.2.2”項下制備的供試品溶液方法平行制備5份供試品溶液，依照“2.1”項下色譜條件測定，精密吸取10μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結果，供試品中梓醇含量的RSD=1.3%，表明本方法的重復性較好。
2.7 加樣回收率試驗。取已測含量的益氣止渴丸適量(批號：20171003)，共6份，研細，取1.5g，精密稱定，分別精密加入梓醇對照品溶液(濃度為0.2014mg/mL)10.0mL，按照“2.2.2”項下方法制備的供試品溶液，并按照“2.1”項下色譜條件測定，精密吸取10μL，注入液相色譜儀，測定并計算回收率，結果見表3
2.8 樣品含量測定。取上述3批樣品適量，按照“2.2.2”項下的供試品溶液制備方法進行配制，精密吸取10μL，注入高效液相色譜儀[2]。另取梓醇對照品溶液(濃度為0.2014mg/mL)適量，依據“2.1”項下色譜條件測定，進樣量10μL，按外標法以峰面積計算供試品中梓醇的含量。20171001含量為1.3621mg/g;20171002含量為1.4234mg/g;20171003含量為1.3928mg/g。
3 討論
中藥是我國的國粹，數千年的應用歷史，為我國留下了輝煌燦爛的中藥文化。近年來，人們越來越關注中藥的使用，患者越來越多的開始服用中藥產品。中藥對于減輕病人的癥狀和痛苦，提高生存質量，延長生命，有重要的意義。中藥治療還有五大特點，①具有較強的整體觀念;②可以彌補手術治療、放射治療、化學治療的不足;③不影響勞動力;④副作用小;⑤經濟。益氣止渴丸是吉林省地方醫院臨床上應用較多的中成藥，對于治療II型糖尿病療效比較顯著，受到很多患者的青睞。本研究建立了一種簡便、快捷、可靠的分析方法，為益氣止渴丸的質量控制提供了理論依據[3]。
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3.1 色譜條件的優化。由于梓醇在210nm的波長處出現最大吸收峰，所以選擇210nm作為檢測波長。此波長接近甲醇的末端吸收，因此試驗選擇了乙腈作為有機溶劑。考察了兩種流動相：乙腈-0.12%磷酸溶液(0.9:99.1，V/V)和乙腈-水(0.9:99.1，V/V)，結果從色譜圖上看出前者的分離效果更好。
3.2 提取溶劑的選擇�？疾炝思訜峄亓魈崛》椒ê屠浣�、超聲處理方法，并且考察不同溶劑(水、甲醇、乙醇)提取，提取時間(30分、40分、50分、1h)，提取溶劑的體積(25mL、50mL、100mL)，結果表明，最優化的提取方法是甲醇溶劑25mL加熱回流提取1.5h。
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